MS-級(jí) Thermo Scientific Pierce 胰蛋白酶/Lys-C 蛋白酶混合物是一種胰蛋白酶和 LysC 的質(zhì)譜 (MS) 級(jí)絲氨酸胞內(nèi)蛋白酶混合物，與單獨(dú)使用胰蛋白酶相比，可以同時(shí)酶切蛋白以實(shí)現(xiàn)更有效的酶切。

MS 級(jí) Pierce 胰蛋白酶/Lys-C 蛋白酶混合物的特點(diǎn)包括：
?增強(qiáng)酶切 — 酶組合可減少胰蛋白酶缺失切割
?便利 — 胰蛋白酶和 LysC 蛋白酶以優(yōu)化的比值提供，以組合使用形式進(jìn)行酶切
?出色的選擇性 — 胰蛋白酶具有 >95% 的 C 端賴氨酸和精氨酸特異性；LysC 具有 >90% 的 C 端賴氨酸切割特異性
?穩(wěn)定 — 酶混合物以凍干形式提供

通過 MS 以高效、可重現(xiàn)的蛋白酶切開始進(jìn)行蛋白表征、鑒別和定量。盡管胰蛋白酶通常用于蛋白酶切，但單獨(dú)這一種蛋白酶并不足以完全酶切賴氨酸和精氨酸殘基的羧基端的蛋白。因此，Lys-C 蛋白酶通常與胰蛋白酶共同作用，以連續(xù)酶切蛋白，缺失切割較少。Pierce 胰蛋白酶/Lys-C 蛋白酶混合物是胰蛋白酶和 LysC 蛋白酶的凍干混合物，已經(jīng)過優(yōu)化以提高蛋白酶切效率。它以 20 μg、5 x 20 μg 或 100 μg 靈活規(guī)格提供，也包括在 EasyPep Mini MS 樣品制備試劑盒中。

此混合物中 MS 級(jí)胰蛋白酶源自豬胰腺提取物，經(jīng) TPCK 處理以消除糜蛋白酶活性并甲基化以改善酶切期間的穩(wěn)定性。MS 級(jí) Lys-C 蛋白酶是一種從產(chǎn)酶溶桿菌中高度純化的天然酶。與胰蛋白酶不同，Lys-C 可以切割賴氨酸然后切割脯氨酸，是與其他蛋白酶配合使用實(shí)現(xiàn)較佳的蛋白酶切的理想選擇。當(dāng)作為混合物使用時(shí)，根據(jù)酶與蛋白比值，酶切可在短短 1.5–3 小時(shí)內(nèi)完成或者過夜。在 -20°C 下儲(chǔ)存時(shí)，該凍干酶混合物可保持穩(wěn)定一年。

? 出色的選擇性—胰蛋白酶具有 >95% 的 C 端賴氨酸和精氨酸特異性；LysC 具有 >90% 的 C 端賴氨酸切割特異性
? 高純度—未檢測到胰凝乳蛋白酶活性（胰蛋白酶）
? 完全酶切—胰蛋白酶/LysC 酶組合可減少胰蛋白酶缺失切割
? 增強(qiáng)穩(wěn)定性—胰蛋白酶經(jīng)過化學(xué)修飾可降低自溶活性
? 便利—酶以穩(wěn)定的凍干或液體形式提供

胰蛋白酶是一種源自豬胰腺提取物的質(zhì)譜 (MS) 級(jí)絲氨酸蛋白酶，特異性切割賴氨酸和精氨酸殘基的羧基側(cè)。該酶經(jīng)過 TPCK 處理消除了糜蛋白酶活性，并通過甲基化進(jìn)行化學(xué)修飾，得到高活性和更穩(wěn)定的酶形式。胰蛋白酶可耐受常用的部分變性條件，如 0.1 SDS、1 M 尿素和 10% 乙腈。Pierce 胰蛋白酶在 pH 7-9 范圍內(nèi)活性較佳，在 pH < 4 條件下可逆失活。胰蛋白酶以 1 mg、5 包 20 μg 或 100 μg 的凍干粉和 100 μg 溶液的形式提供。

Lys-C 蛋白酶是從產(chǎn)酶溶桿菌中分離獲得的質(zhì)譜 (MS) 級(jí)絲氨酸蛋白酶。Lys-C 蛋白酶對(duì)賴氨酸殘基具有較高的活性和特異性，與胰蛋白酶（即較少的肽段）相比，肽段較大，樣品的復(fù)雜性較低。與胰蛋白酶不同，Lys-C 蛋白酶可以先切割賴氨酸然后切割脯氨酸，這使其適用于序列蛋白酶切，然后進(jìn)行胰蛋白酶酶切，以減少切割缺失。這些獨(dú)特的 Lys-C 蛋白酶特性可確保單獨(dú)使用或隨后進(jìn)行胰蛋白酶酶切時(shí)的高酶切效率。此外，Lys-C 原型肽通常具有較高的電荷狀態(tài)，使其成為 ETD 片段化的首選酶。

Lys-C 胰蛋白酶通常用于磷酸肽富集工作流程中，因?yàn)榭稍?N 和 C 端生成帶有伯胺的肽，可利用胺反應(yīng)性同量異位標(biāo)簽對(duì)片段進(jìn)行雙標(biāo)記。這導(dǎo)致肽電離增強(qiáng)和定量限提高，因?yàn)樵?MS3 采集期間可重新分離更多碎片離子。該酶可用于溶液內(nèi)或膠內(nèi)酶切工作流程，以產(chǎn)生用于 LC-MS/MS 蛋白鑒別的肽。

在 37°C 下可在 2 小時(shí)內(nèi)完成高效蛋白酶切。在高度變性條件下（如 8 M 尿素、2 M 鹽酸胍、1% SDS、2% CHAPS 和 40% 乙腈），Lys-C 蛋白酶可保持活性，并在 pH 7–9 條件下充分發(fā)揮作用（pH 8 下活性最大）。該凍干酶的質(zhì)量為 30 kDa，在 –20°C 下儲(chǔ)存時(shí)可保持穩(wěn)定 1 年。該 Lys-C 酶以凍干形式（20 μg 或 100 μg含量）包裝。

胰蛋白酶/Lys-C 蛋白酶混合物是胰蛋白酶和 LysC 蛋白酶的凍干混合物，已經(jīng)過優(yōu)化以提高蛋白酶切效率。盡管胰蛋白酶通常用于蛋白酶切，但單獨(dú)這一種蛋白酶并不足以完全酶切賴氨酸和精氨酸殘基的羧基端的蛋白。因此，Lys-C 蛋白酶通常與胰蛋白酶共同作用，以連續(xù)酶切蛋白，缺失切割較少。胰蛋白酶/Lys-C 蛋白酶混合物以 20 μg、5 x 20 μg 或 100 μg 靈活規(guī)格提供。根據(jù)酶與蛋白比值，酶切可在短短 1.5–3 小時(shí)內(nèi)完成或者最長過夜完成。

胰凝乳蛋白酶、GluC、Asp-N 蛋白酶

? 增加序列覆蓋范圍—具有互補(bǔ)色譜、電離和片段化特性的重疊肽的蛋白表征結(jié)果較佳
? 高比活性—每種蛋白酶都具有極好的酶特異性
?穩(wěn)定—以凍干形式提供

Asp-N 蛋白酶是一種 MS 級(jí)鋅金屬蛋白酶，來源于莓實(shí)假單胞菌的突變菌株，需要痕量鋅來維持活性。Asp-N 蛋白酶主要在半胱氨酸氧化產(chǎn)生的天冬氨酸和半胱氨酸的氨基側(cè)切割。也可能在谷氨酸殘基切割；但是，谷氨酰基殘基的切割率顯著低于天冬氨酸殘基的切割率。在 37°C 條件下，Asp-N 蛋白酶可在 2–20 小時(shí)內(nèi)高效酶切蛋白，活性大于 20,000 單位/mg 蛋白，在變性條件（如 1 M 尿素、2 M 鹽酸·胍、0.1% SDS、2% CHAPS 和 10% 乙腈）下仍可保持活性，在 pH 6–8 條件下具有較佳活性。該凍干酶的質(zhì)量為 27 kDa，在 -20°C 下儲(chǔ)存時(shí)可保持穩(wěn)定 1 年。

Glu-C 蛋白酶也稱為 V-8 蛋白酶，是從金黃色葡萄球菌中分離獲得的 MS 級(jí)絲氨酸蛋白酶。Glu-C 蛋白酶特異性切割碳酸氫銨和醋酸銨緩沖液中谷氨酸殘基的羧基側(cè)，產(chǎn)生少量的肽片段。在磷酸鹽緩沖液中也可能在谷氨酸和天冬氨酸殘基切割。在 37°C 條件下，Glu-C 蛋白酶可在 5–18 小時(shí)內(nèi)高效酶切蛋白，活性大于 500 單位/mg 蛋白，在變性條件（如 2 M 尿素、1 M 鹽酸胍、0.1% SDS、2% CHAPS 和 20% 乙腈）下仍可保持活性。在 pH 8 條件下，Glu-C 蛋白酶活性較佳。該凍干酶的質(zhì)量為 27 kDa，在 -20°C 下儲(chǔ)存時(shí)可保持穩(wěn)定 1 年。

胰凝乳蛋白酶是一種從牛胰腺中分離獲得的 MS 級(jí)胞內(nèi)蛋白酶，特異性切割酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸和亮氨酸的羧基側(cè)。在牛胰腺中發(fā)現(xiàn)兩種主要形式的胰凝乳蛋白酶 A 和 B，其含量相等。它們是相似的蛋白質(zhì)（80% 同源性），但具有不同的蛋白水解特征。Thermo Scientific 胰凝乳蛋白酶有兩種形式的胰凝乳蛋白酶。由于胰蛋白酶可能與天然來源的胰凝乳蛋白酶共純化，Thermo Scientific 胰凝乳蛋白酶經(jīng) TLCK 處理以消除可能的胰蛋白酶活性，提高酶切特異性。胰凝乳蛋白酶可以耐受溫和的變性條件，如 0.1% SDS、2 M 尿素、2 M 鹽酸·胍、1% CHAPS 和 30% 乙腈，在 pH 7.5–8.5 條件下具有較佳活性。該凍干酶的質(zhì)量為 25 kDa，在 -20°C 下儲(chǔ)存時(shí)可保持穩(wěn)定 1 年。